菲羅門色譜柱的維護對于延長其使用壽命、保持分離效果和確保實驗準確性至關重要。以下是系統化的維護策略及具體操作步驟:
1.過濾凈化不可少
所有溶劑必須經過0.22μm濾膜過濾,建議使用帶預過濾器的保護裝置進行在線過濾;
水相流動相應脫氣處理(超聲震蕩或在線脫氣機),避免溶解氧導致填料氧化降解。
2.pH值嚴格控制
常規C18/C8柱建議保持pH范圍2-8;若使用極*pH條件,須選用專用耐酸堿填料;
緩沖鹽濃度不超過50mM以防止鹽析出結晶堵塞管路。
3.避免顆粒物沖擊
樣品溶液需先經針筒過濾器過濾后再進樣;
禁止直接注射渾濁溶液或含懸浮物的復雜基質。
二、菲羅門色譜柱周期性保養流程
1.基礎沖洗程序(每月一次)
反向沖洗再生法
切換為高比例強溶劑,以正常流速反向沖洗60分鐘;
此操作可有效去除累積的弱保留雜質,恢復柱效達初始值的95%以上。
過渡梯度平衡
完成分析后繼續運行5%~10%梯度增量直至基線平穩,防止不同批次間交叉污染。
保存溶劑置換
長期閑置時改用同比例混合的甲醇/乙腈溶液保存,每周更換新鮮溶劑防止微生物滋生。
2.深度清潔方案(每季度實施)
針對嚴重污染情況可采用分段式清洗策略:
脂溶性污染物清除
依次用正己烷→異丙醇→二氯甲烷各沖洗30分鐘,中間穿插空白運行檢測殘留;
注意:避免使用氯仿等強鹵代烴類溶劑以免損傷封端鍵合相。
離子型殘留分解
配制含0.1%三氟乙*的乙腈溶液,低流速循環清洗2小時;
后續用pH7緩沖液中和至中性后再過渡回常規流動相。
生物活性物質滅活
對蛋白質結合導致的失活現象,可用含0.05%疊氮鈉的磷酸鹽緩沖液浸泡過夜。
